Identification and characterization of new listeria monocytogenes virulence factors

As doenças infeciosas são uma das principais causas de morte mundialmente, sendo a principal em bebés e crianças. Embora os tratamentos convencionais para combater infeções microbianas sejam muito eficazes, geram subpopulações bacterianas resistentes. O controlo da virulência bacteriana e a modulação da resposta do hospedeiro surgem como alternativas terapêuticas promissoras para combater as infeções. Listeria monocytogenes é uma ameaça recorrente para a saúde pública e para a indústria alimentar. É um patogénio Gram-positivo e intracelular de origem alimentar e um excelente modelo para o estudo da interação do hospedeiro com o patogénio. Esta bactéria tem a capacidade de atravessar as barreiras intestinal, hematoencefálica e materno-fetal e colonizar tecidos do hospedeiro podendo causar listeriose. Esta capacidade é alcançada através da expressão de inúmeros fatores de virulência que permite L. monocytogenes invadir, sobreviver e multiplicar dentro de células fagocíticas e não-fagocíticas. A análise do modo como este patogénio manipula as funções celulares do hospedeiro, leva à identificação de novos mecanismos que podem ser alargados a outros patogénios relevantes e ajuda na criação de novas estratégias terapêuticas. Deste modo, este trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar novos mecanismos de virulência de L. monocytogenes. A primeira análise transcriptómica in vivo de L. monocytogenes revelou que vários genes são mais expressos no baço de morganhos infetados e que a maioria desses fatores de virulência são proteínas de superfície e proteínas secretadas. Neste trabalho, selecionámos três genes mais expressos in vivo, lmo2114, lmo2115 e lmo2522 com uma possível função na virulência de L. monocytogenes. Mutantes de deleção foram gerados para caracterizar o papel dos genes deletados no processo infecioso, analisando diferentes etapas do ciclo de infeção celular in vitro e virulência in vivo. Nós mostrámos que o transportador ABC, codificado pelos genes lmo2114 e lmo2115, é necessário para a entrada da bactéria em células eucarióticas e para a virulência in vivo. Além disso, observámos que uma proteína possivelmente de ligação à parede celular e codificada por lmo2522 é necessária para a capacidade de L. monocytogenes aderir e invadir células Caco-2 e importante para virulência in vivo. De modo geral, este trabalho permitiu a identificação de novos genes de virulência de L. monocytogenes importantes para a infeção e, assim, e gerou possíveis e novos alvos para o desenvolvimento de estratégias de anti-virulência.Infectious diseases are one of the main responsible of deaths worldwide, being the prime cause of death in infants and children. Conventional approaches to combat microbial infections are very effective, however they generate strong resistant subpopulations. The control of bacterial virulence and the modulation of the host response appear as promising therapeutic alternatives to overcome infections. Listeria monocytogenes is a recurrent problem in public health and food industry. It is a foodborne Gram-positive intracellular pathogen and an outstanding model to study host-pathogen interactions. This bacterium has the ability to cross the intestinal, blood-brain and the placental barriers and colonize host tissues causing listeriosis. This capacity is achieved by numerous virulence factors that allow L. monocytogenes to invade, survive and multiply within phagocytic and non-phagocytic cells. Analysis of how this pathogen manipulates the host cell functions, leads to the identification of new mechanisms that could be extended to other relevant pathogens, and help designing new therapeutic strategies. Therefore, this work aimed to identify and characterize new L. monocytogenes virulence mechanisms. The first in vivo transcriptomic analysis of L. monocytogenes revealed that a number of virulence genes are highly expressed during mouse infection and that the majority of these virulence factors are surface and secreted proteins. To identify new virulence determinants, we selected three up-regulated in vivo genes, lmo2114, lmo2115 and lmo2522 with a putative role in L. monocytogenes virulence. Deletion mutant strains were generated in order to characterize the role of the deleted genes in the L. monocytogenes infectious process by analysing different steps of cell infection cycle in vitro and virulence in vivo. We showed that the ABC transporter, which is encoded by lmo2114 and lmo2115, is required for bacterial entry in eukaryotic cells and full virulence in vivo. Moreover, we observed that the putative cell wall-binding protein encoded by lmo2522 is necessary for L. monocytogenes ability to adhere and invade Caco-2 cells and importantly for in vivo virulence. Altogether, this work allowed the identification of new L. monocytogenes virulence genes important for infection and thus provided new targets for the development of anti-virulence strategies

Investigation of the genetic etiology of sensorineural hearing loss in portuguese patients

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012About 2/1000 new born present hearing loss (HL) and of these, approximately 50% can be genetically explained. In this work, 70 Portuguese probands presenting nonsyndromic sensorineural HL were investigated for the presence of mutations in the DFNB1 locus. Mutation c.35delG, in the GJB2 gene, was first screened by restriction analysis. Two individuals were homozygous (2,9%) and five (7,1%) heterozygous for this mutation. The GJB2 coding exon was then analysed by sequencing in cases found to be negative or heterozygous for the c.35delG mutation. A novel mutation, p.Leu213X, was identified. This mutation wasn’t present in a random control sample of 480 individuals from the Portuguese population previously sequenced. Along with the two c.35delG homozygous, the genetic cause for HL due to GJB2 mutations could be determined for six more individuals, representing a total of 11,4% of the probands. The most frequent GJB6 deletions were further screened by multiplex PCR in individuals negative or monoallelic for GJB2 mutations. No mutation was found. Three common mitochondrial DNA mutations associated to HL were investigated by enzymatic restriction in 143 families, previously screened for DFNB1 and compatible with maternal inheritance. Only the m.1555A>G mutation was found, in one of the analysed families. Two cases of low-frequency sensorineural HL were investigated regarding the most relevant exons of WFS1 gene. A novel mutation, p.Asp171Asn, was found in exon 5 of WFS1 gene. This mutation wasn’t present in 100 Portuguese hearing controls later sequenced. Two cases of Pendred Syndrome were studied. No mutation was found in the relevant exons analysed. So, the genetic cause couldn´t yet be determined. This study represents a contribution for extending the knowledge on hereditary HL in the Portuguese population, either in the identification of the genetic etiology in affected families, or in the development of more accurate diagnostic protocols.Cerca de 2/1000 recém-nascidos apresentam surdez e, nestes, aproximadamente 50% têm uma causa genética. No presente trabalho, foram estudados 70 probandos Portugueses com surdez não- sindrómica neurosensorial. A análise iniciou-se com o estudo da mutação c.35delG no gene GJB2 através de restrição enzimática. Dois indivíduos apresentaram esta mutação em homozigotia (2,9%) e cinco em heterozigotia (7,1%). O exão codificante de GJB2 foi analisado por sequenciação em todos os casos negativos ou heterozigóticos para c.35delG. Uma nova mutação, p.Leu213X, foi descoberta. Esta mutação não foi encontrada numa amostra aleatória de 480 indivíduos da população Portuguesa. Juntamente com os indivíduos homozigóticos para c.35delG, a causa genética da surdez devida a GJB2 foi determinada para mais seis indivíduos, representando no conjunto 11,4% dos probandos. As deleções mais frequentes no gene GJB6 foram investigadas por PCR multiplex em indivíduos monoalélicos ou negativos para GJB2. Nenhum dos indivíduos apresentou deleções em GJB6. As três mutações mais comuns associadas a surdez no DNA mitocondrial foram investigadas por restrição enzimática em 143 famílias previamente testadas para GJB2 e compatíveis com hereditariedade materna. Apenas numa família foi encontrada a mutação m.1555A>G. Dois casos de surdez neurosensorial com perdas nas baixas frequências foram estudados através da análise dos exões mais relevantes do gene WFS1. Uma nova mutação, p.Asp171Asn, foi encontrada no exão 5 deste gene. Esta mutação não foi encontrada em 100 controlos Portugueses ouvintes posteriormente sequenciados. Dois casos esporádicos de Síndrome de Pendred foram estudados mas nenhuma mutação foi encontrada nos exões analisados, pelo que a causa genética não pôde ser ainda determinada. Este estudo constituiu uma contribuição para aprofundar o conhecimento sobre a surdez hereditária na população Portuguesa. A importância do estudo genético fica aqui patente, quer na identificação da etiologia genética da surdez em famílias afectadas, quer no desenvolvimento de protocolos de diagnóstico mais eficazes

COVID-19 fatality rates in hospitalized patients: systematic review and meta-analysis

Coronavirus disease (COVID-19) is an infectious disease caused by a newly discovered coronavirus. Although general and local public health report deathly cases, case fatality rates are still largely unknown. Thus, we sought to evaluate the mortality of COVID-19.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

O projeto político do povo negro para o Brasil: narrativas políticas e identitárias de uma nação “igualmente imaginada”

The context of the refoundation of Brazilian democracy brings, among its main innovations, the inclusion of black people in the structuring of the national project. In view of this, in this thesis I analyze how the racial issue came to be incorporated into the construction of the nation. To do so, I examine this debate both through documentation written by black intellectuals and activists and government records. In this way, it is a research that investigates not only the framework of redemocratization and the National Constituent Assembly, but also the process of elaboration of new imaginaries, which compose and resignify the nation in contemporary times.O contexto da refundação da democracia brasileira traz, dentre suas principais inovações, a inserção dos negros na estruturação do projeto nacional. À vista disto, nesta tese, analiso como a questão racial passou a ser incorporada à construção da nação. Para tanto, examino este debate tanto por meio da documentação escrita por intelectuais e ativistas negros quanto por meio de registros governamentais. Deste modo, trata-se de uma pesquisa que investiga não apenas o quadro da redemocratização e da Assembleia Nacional Constituinte, mas também o processo da elaboração de novos imaginários, os quais compõem e ressignificam a nação na contemporaneidade.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Promoção da adesão ao regime terapêutico da pessoa com doença mental grave

Com o presente Relatório de Estágio pretendo dar a conhecer a experiência e o trabalho desenvolvido durante o percurso de estágio de Enfermagem de Saúde Mental e Psiquiátrica. Assente nos modelos teóricos de enfermagem de Hildegard Peplau e Betty Neuman, tendo como finalidade a “Promoção da adesão ao regime terapêutica da pessoa com doença mental grave”, definiu-se como objetivos gerais: Promover a adesão ao regime terapêutico da pessoa com doença mental grave e Adquirir competências do enfermeiro especialista em enfermagem de saúde mental e psiquiátrica. Em contexto de internamento e em hospital de dia, através da realização de intervenções especializadas de enfermagem, nomeadamente de âmbito psicoterapêutico e psicoeducacional. As intervenções foram centradas na Pessoa com abordagem do domínio relacional baseada na empatia, respeito e autenticidade, considerando as características, competências, necessidades e recursos do utente e do grupo. A avaliação da eficácia das intervenções foi realizada através da observação de comportamento e atividades realizadas após a sessão

@distrito.cerrado : uma revista para Instagram sobre vida sustentável no Distrito Federal

Trabalho de Conclusão de Curso (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Comunicação, Departamento de Jornalismo, 2019.A pesquisa visa analisar a viabilidade de ampliação do alcance de temas de valor ético na sociedade, mais especificamente a sustentabilidade e a conservação ambiental, por meio da produção de conteúdos jornalísticos para a rede social Instagram. O estudo consiste na memória de uma revista digital feita inteiramente na rede social que discute temas relacionados à sustentabilidade e meio ambiente no contexto do Distrito Federal. O projeto explorou possibilidades de inovação no fazer jornalístico no que se refere a sua forma e também a seus critérios de seleção de notícias com objetivo de inserir temáticas ligadas ao interesse público na mídia. Inicialmente, o trabalho dedica-se a fazer uma breve revisão teórica sobre sustentabilidade no século XXI, valor-notícia por trás de temáticas ambientais e adaptações do jornalismo a novas plataformas online. A primeira edição da revista aborda questões relacionadas ao caso do Ribeirão Sobradinho, curso d’água poluído por despejo de esgoto e por outras intervenções humanas por meio de reportagens escritas e videorreportagens. Assim, o projeto explora e propõe novos caminhos para o jornalismo em meio às inovações tecnológicas e os desafios que as primeiras décadas do século XXI apresentam.The research aims to analyze the feasibility of expanding the reach of ethical issues in society, specifically sustainability and environmental conservation, by adapting journalistic content to the Instagram social network. The study consists of the memory of a digital magazine made entirely on the social network that discusses issues related to sustainability and environment in the context of the Federal District. The project explored possibilities for innovation in journalism in terms of its form and also its news selection criteria in order to insert topics related to the public interest in the media. Initially, the paper is dedicated to a brief theoretical review of sustainability in the 21st century, news value behind environmental issues and journalism adaptations to new online platforms. The first edition of the magazine addresses issues related to the case of Ribeirão Sobradinho, a water course polluted by sewage disposal and other human interventions through written reports and video reports. Thus, the project explores and proposes new avenues for journalism amidst technological innovations and challenges that the first decades of the 21st century present

A recuperação de empresas em Portugal e o impacto do PEVE em época de Covid 19

A escolha deste tema surgiu no âmbito da entrada temporária em vigor da Lei n.º 75/2020, 27 de novembro, em consequência da “infeliz” pandemia mundial oriunda da COVID-19. Esta Lei veio alterar de forma temporária as medidas relativas ao Processo de Insolvência e Recuperação de Empresas. As medidas centram-se na criação do Processo Extraordinário de Viabilização de Empresas, a obrigatoriedade de rateios parciais em processo de insolvência entre outras. Apesar das diversas medidas a presente dissertação será centrada no Processo Extraordinário de Viabilização de Empresas em comparação com o Processo Especial de Revitalização que já se encontra presente no nosso ordenamento jurídico. A presente dissertação tem como finalidade o estudo de alguns pontos fulcrais do regime jurídico do Processo Extraordinário de Viabilização de Empresas e do Processo Especial de Revitalização, comparando alguns aspetos entre eles. É neste contexto que a escolha do tema se justifica, por ser um tema extremamente atual, que surgiu devido à necessidade de adaptação dos instrumentos judiciais de recuperação económica causada pela pandemia, por conseguinte ocorrem novos desafios sendo necessário uma rápida adaptação e interiorização. O tema abordado foi em parte tratado na parte letiva do mestrado, nomeadamente no que concerne ao Processo Especial de Revitalização, e suscitou um interesse pessoal relativamente às novas medidas e como estas podem influenciar para possibilitar a recuperação de empresas que tinham ativo superior ao passivo até 31 de dezembro de 2019 e que em consequência da doença COVID-19 viram o inverso ocorrer de uma forma muito repentina

Calibração e Qualificação: Controlo da Qualidade

O presente relatório insere-se no âmbito da Calibração e Qualificação de equipamentos no setor da Indústria Farmacêutica no sentido de promover a implementação de procedimentos que diminuam o risco do uso dos mesmos. Este projeto surgiu através do estágio curricular de Mestrado em Engenharia Biológica e Química na Escola Superior de Tecnologia do Barreiro e decorreu na Indústria Farmacêutica IBERFAR, S.A., durante os meses de março a agosto de 2019. O risco inerente à utilização de equipamentos em ensaios de controlo da qualidade, especialmente em laboratórios farmacêuticos, é um tema bastante emergente. Assim, este projeto pretende através da aplicação da metodologia Análise do modo de falha e seus efeitos (FMEA - Failure Mode and Effects Analysis), propor ações preventivas de forma a garantir a fiabilidade dos ensaios analíticos e evitar problemas futuros no produto final que possam pôr em risco a saúde dos consumidores.This report address the relevance of the Calibration and Qualification of equipment in the Pharmaceutical Industry sector in order to promote the implementation of procedures that reduce the risk of their use. This project emerged through the curricular internship of Master in Biological and Chemical Engineering at Escola Superior de Tecnologia do Barreiro and took place in the Pharmaceutical Industry IBERFAR, S.A., from March to end of August 2019. The risk inherent in the use of equipment in quality control tests, especially in pharmaceutical laboratories, is a very relevant topic nowadays. Thereby, this project aims, through the application of the methodology Failure Mode and Effects Analysis (FMEA), to propose preventive actions in order to ensure the reliability of analytical tests and avoid future problems in the final product that could put at risk the health of consumers